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中华绒螯蟹Kcna基因功能及其与生长性状的关联分析  PDF

  • 薛磊 1,2,3
  • 侯鑫 1,2,3
  • 曾详健 1,2,3
  • 陈晓雯 1,2,3
  • 王军 1,2,3
  • 王成辉 1,2,3
1. 上海海洋大学 农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306; 2. 上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心,上海 201306; 3. 上海海洋大学 上海水产养殖工程技术研究中心,上海 201306

中图分类号: S 917

最近更新:2024-05-21

DOI: 10.12024/jsou.20231204385

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目录contents

摘要

为探究中华绒螯蟹Kcna基因的结构、表达模式及生长发育中的分子功能,克隆了中华绒螯蟹Kcna(命名为Es-Kcna)基因的全长,并开展了生物信息学分析和时空表达模式研究;观察了干扰Kcna基因后中华绒螯蟹生长表型性状的变化;筛选了Es-Kcna基因的SNP标记并与种群地理分布、生长性状进行了关联分析。结果显示:Kcna基因位于中华绒螯蟹第46号染色体上,全长945 304 bp,含有9个外显子;其中,cDNA全长2 080 bp,开放阅读框1 584 bp,编码527个氨基酸;原子总量为8 433,分子结构式为C2719H4210N702O787S15,预测蛋白等电点(pI)为5.23,相对分子量为59.81 Ku。系统进化树分析显示Es-Kcna基因与三疣梭子蟹Kcna基因的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示Es-Kcna基因在蜕壳前期、蜕壳间期和蜕壳后期的肌肉、心脏、肠道等6种组织中均有表达,其中以肌肉组织中的表达丰度最高。与对照组相比,干扰Kcna基因的表达后,实验组蟹的体质量、蜕壳增重率和第二步足长度显著降低;肌肉组织切片结果显示实验组步足肌肉肌纤维直径小于对照组。此外,在Es-Kcna基因的第8外显子上鉴定出1个SNP位点(A1 461G),该位点在辽河野生群体显著富集GG基因型,而在长江野生群体富集AA基因型。生长性状的关联分析表明,具有AA型个体的步足长度显著长于GG型个体。本研究为Kcna基因调控中华绒螯蟹生长的分子功能和遗传育种研究提供了研究基础,并为区分长江、辽河野生中华绒螯蟹提供重要参考。

电压门控钾离子通道蛋白(Voltage-gated potassium channel protein shaker, Kcna)是一类跨膜糖蛋白,结构高度保守,由α亚基组成的同源四聚体构成,广泛存在于原核生物及真核生物细胞膜上,是钾离子通道家族中的重要成员之

1Kcna基因在参与肌细胞增殖、骨骼肌收缩、上皮细胞电解质转运和调节心率等方面发挥重要作2-4。ISHIDA5报道了Kcna基因的缺失型突变可以引起人(Homo sapiens)神经性肌肉强直和良性家族性癫痫。XU6发现Kcna基因能够参与基础代谢从而调节小鼠(Mus musculus)体质量。RUIZ7证明果蝇(Drosophila melanogaster)体内Kcna基因能够维持神经元和肌肉细胞的电兴奋性,对其肌肉发育具有重要的分子调控作用。除此之外,在水产动物中,钾离子通道蛋白家族相关基因也参与了鱼类尾鳍发育、免疫调控等过程。KON8发现钾离子通道蛋白Kcnk5b是影响金鱼(Carassius auratus)尾鳍长度的关键基因。SILIC9发现斑马鱼(Danio rerio)中钾离子通道蛋白基因Kcnj13、Kcnj1b、Kcnj10a、Kcnk9的突变都能诱导长鳍表型。PERATHONER10等发现Kcnk5b基因的单个碱基突变会造成斑马鱼突变体alf (another long fin)的长尾鳍表型。CONG11研究发现KcnaKcnc1两种钾离子通道蛋白基因参与了鲈鱼(Lateolabrax japonicus)巨噬细胞的先天性免疫防御过程。刘春影12研究发现Kcnn2基因参与了星斑川鲽(Platichthys stellatus)淋巴细胞和中性粒细胞的免疫应答反应。此外,钾离子通道蛋白家族基因如Kcna,在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、克氏原螯虾(Procambarus clarkii)、斑节对虾(Penaeus monodon)、凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)等多种甲壳动物基因组中均有发现,但其对甲壳动物生长发育等的分子功能研究仍有待深入。

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis),又名河蟹,是我国重要的名贵水产品,是我国很多地区水产养殖的特色产

13。生长蜕壳、肌肉发育、步足长度等是中华绒螯蟹选育过程中的重要目标性状,选育出具有长步足的新品种是主要研究方向之14。研究Kcna基因对重要性状形成的分子调控机制有助于中华绒螯蟹的养殖管理和良种选育。鉴于Kcna基因在调控动物肌肉发育、生长等方面的分子功能,本研究旨在通过中华绒螯蟹Kcna基因的克隆、时空表达分析和RNA干扰实验,解析中华绒螯蟹Kcna基因结构和分子功能,并筛选出在不同水系中华绒螯蟹中存在明显分化且与生长性状相关联的SNP位点,以期为中华绒螯蟹的种质保护和良种选育等提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

本实验中筛选Kcna基因SNP分子标记的2龄实验蟹来自于上海海洋大学水产动物种质资源研究室前期(2005—2017年)收集的长江、辽河水系野生群体以及养殖群体,开展Kcna基因分子功能的1龄实验蟹为在实验室条件下饲养的“江海21”品种。选取生长健康、规格一致(2~3 g)的扣蟹放在循环水养殖系统中饲养,水温(26±1) ℃,每天喂食两次并及时清理残饵与粪便。取蜕壳后2 d(蜕壳后期)、蜕壳后15 d(蜕壳间期)和新颚足刚毛形

15(蜕壳前期)实验蟹,无菌环境下分别取肝胰腺、肠道、肌肉、鳃、眼柄和心脏组织,-80 ℃保存用于RNA提取;实验过程中操作人员严格遵守实验动物相关伦理规范。

1.2 Es-Kcna基因的cDNA全长克隆

在NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库中下载预测的中华绒螯蟹Kcna(XM_050831530.1)基因序

16,为验证拼接序列的准确性,根据已知序列设计cDNA全长克隆引物,完成Kcna基因全长的克隆验证(表1)。具体是:参照本实验室方17提取河蟹不同组织的总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳以及Nano Drop 2000紫外分光光度计分析RNA纯度及浓度,检测合格后利用3'/5'RACE试剂盒(上海生工生物工程股份有限公司)将RNA逆转录成cDNA并进行巢式PCR扩增,具体反应体系和扩增程序参照董18的研究方法。获得目的片段后,通过琼脂糖凝胶电泳将PCR产物目的条带切胶回收,纯化后连接至pMD19-T载体上,再转化至E.coli-DH5α感受态细胞上,经菌液PCR验证,将阳性克隆送至上海生工生物工程股份有限公司测序。

表1  Kcna基因分子克隆、荧光定量PCR、RNA干扰及SNP分子标记筛选引物
Tab.1  Primers designed for cloning, qPCR, RNA interference and SNPs screening of Kcna gene
引物Primers序列(5'-3')Sequences用途Usage
K-5race-RT TGGCACGTTGACTGGTCTTC 5race
K-5race-1R CCGGTTGCGATCGAAGAAGT
K-5race-2R TCCGGAAACTGATTCAACGT
K-3race-1F TCGGCTCACTGTGTGCCATC 3race
K-3race-2F CAGACCAGGAGGAGATGCAG
K-ORF-F GGCCTCGCTTGGGATTACAC

ORF克隆

cloning of ORF

K-ORF-R TGAATCCTTCCTGCCACACAA
K-qpcr-F GCCGGAGAACGAATTCCAAA qPCR
K-qpcr-R TGATGGCAACCACTCTAGCA
S27-F GGTCGATGACAATGGCAAGA
S27-R CCACAGTACTGGCGGTCAAA
K-ds-F TACGTTGGCGACTGTGGTAG

RNA干扰

RNA interference

K-ds-R GCGGGTTGCAATTCTGCTTT
G-ds-F CAGTGCTTCAGCCGCTACCC
G-ds-R AGTTCACCTTGATGCCGTTCTT
K-T7-ds-F taatacgactcactatagggTACGTTGGCGACTGTGGTAG
K-T7-ds-R taatacgactcactatagggGCGGGTTGCAATTCTGCTTT
G-T7-ds-F taatacgactcactatagggCAGTGCTTCAGCCGCTACCC
G-T7-ds-R taatacgactcactatagggAGTTCACCTTGATGCCGTTCTT
K-SNP-F ACCATCTCTATACCCTGTCCCTT

SNP筛选

SNP screening

K-SNP-R TCAGACGTCAGTTTCGATGCTCAT

1.3 Es-Kcna基因的生物信息学分析

利用DNAMAN软件进行测序序列的拼接和人工校准。分别利用ORFfinder (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)预测Kcna基因的开放阅读框,Expasy(http://web.expasy.org/protparam/)预测蛋白质理化性质,TMHMM 2.0 (https://services.healthtech.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)预测蛋白跨膜结构域,SMART (http://smart.embl-heidelberg.de/)预测蛋白质结构和功能。为构建Kcna基因的系统进化树,分别从NCBI数据库上下载三疣梭子蟹、克氏原螯虾、斑节对虾、凡纳滨对虾、中国明对虾(Penaeus chinensis)、日本对虾(Penaeus japonicus)、红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)和果蝇的Kcna基因的氨基酸序列,利用Clustal W软件进行氨基酸多序列比对,然后用MEGA 11.0软件中的最大似然法构建系统发育进化树。

1.4 Es-Kcna基因的时空表达模式探究

将不同蜕壳时期的肌肉、心脏、肝胰腺、眼柄、鳃和肠道的总RNA逆转录成cDNA。逆转录体系:5× gDNA digester Mix 3 μL,Total RNA 1 μg,RNase-free H2O 补充至 15 μL;反应程序:42 ℃孵育2 min,向反应液中加入4× Hifair Ⅲ SuperMix plus 5 μL,25、55、85 ℃分别反应5、15、5 min。qPCR引物及内参基因见表1,反应体系:SYBR Green remix Ex Taq 10 μL;上下游引物各0.4 μL;模版cDNA 1.0 μL;ddH2O 8.2 μL,共计20 μL;反应程序:95 ℃ 30 s,95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,共40个循环;每个组织样本有6个生物学重复,每个样本设3个技术重复,利用2-ΔΔCt法计算相对表达量,具体计算方法参照姜鹏

19的资料。

1.5 Es-Kcna基因的RNA干扰实验

使用RiboMAX™ Large Scale RNA Production Systems试剂盒(Promega,美国)合成KcnaGFP基因的dsRNA序列。实验初始时,挑选规格一致的实验蟹共36只,每只蟹记录初始体质量(W1)、壳长(L1)和第二步足长度(F1,下文简称步足长度),随机分为实验组和对照组,每组18只;分别从左侧第二步足基部注射等量的Kcna基因的dsRNA(3 μg/g)(实验组)和不含有Kcna基因序列的绿色荧光蛋白GFP基因的dsRNA(对照组)。两组均每3天注射1次,直到下一次蜕壳完成。RNA干扰过程中,每天检查记录蜕壳和死亡情况。在下一次蜕壳后第4天,记录终末体质量(W2)、壳长(L2)和步足长度(F2),记录每只蟹的蜕壳间隔天数(M),并计算蜕壳增重率(WGR)和特定生长率(SGR),公式如下:

WGR(%)=100×(W2-W1)/W1 (1)
SGR(%/d)=100×(lnW2-lnW1)/M (2)

式中:W1W2分别为初始和终末时各组扣蟹平均体质量;M为每只蟹的脱壳间隔天数。

干扰周期结束后,对实验蟹左侧第二步足肌肉取样,进行石蜡切片和H.E染色,并利用Image J软件进行肌纤维直径测量。具体测量方法是:在显微镜下随机选取5个视野,每个视野内任选10根肌纤维测量其长轴与短轴,计算出两者平均值,即为肌纤维直

20

1.6 Es-Kcna基因的SNP标记筛选及与生长性状的关联分析

对不同年份长江(2005、2014、2017)和辽河(1999、2014、2017)水系共256只野生中华绒螯蟹样本及245只来自于养殖群体的样本进行DNA提取和PCR扩增,使用Bioedit软件进行测序结果比对并结合峰图筛选Kcna基因的SNP位点。将筛选出的SNP位点与中华绒螯蟹的水系来源、生长性状进行关联分析,统计不同水系中华绒螯蟹SNP基因型的分布频率,用Graphpad Prism 9.0.0进行生长性状与基因型的关联性分析。

2 结果

2.1 Es-Kcna基因的结构、理化性质及系统进化

基于测序验证获得的Kcna基因序列,结合已经发表的中华绒螯蟹基因

16,发现Kcna基因位于中华绒螯蟹第46号染色体上,全长945 304 bp,共包括9个外显子(图1a);cDNA全长2 080 bp,其中ORF为1 584 bp,共编码527个氨基酸,具有1个BTB结构域和5个跨膜结构区(图1b)。理化分析显示Es-Kcna基因的原子总量为8 433,分子结构式为C2719H4210N702O787S15,预测蛋白等电点(pI)为5.23,相对分子量为59.81 ku。系统进化树结果显示Es-Kcna基因与三疣梭子蟹Kcna基因的亲缘关系最近(图2)。

图1  中华绒螯蟹Kcna基因结构和蛋白结构域预测

Fig.1  Gene structure and protein domain prediction of Kcna gene in E.sinensis

(a)Kcna基因结构;(b)Kcna预测蛋白结构域。

(a) Gene structure of Kcna; (b) Protein domain prediction of Kcna.

图2  中华绒螯蟹与其他节肢动物Kcna基因系统进化树

Fig.2  Phylogenetic tree of Kcna gene among E. sinensis and other arthropod species

2.2 Es-Kcna基因时空表达分析

荧光定量发现Kcna基因在中华绒螯蟹不同蜕壳时期的肌肉、肠道、眼柄、心脏、鳃和肝胰腺中均有表达。整体而言,在肌肉和心脏中的表达量相对较高,蜕壳间期和后期肌肉中表达量最高(图3a,3c),蜕壳前期心脏中表达量最高(图3b),而鳃和肝胰腺在3个时期表达量均很低(图3a,3b,3c)。

图3  Kcna基因在中华绒螯蟹不同组织和不同蜕壳时期中的表达情况

Fig.3  Expression profiles of Kcna gene in different tissues and molting stages of E.sinensis

(a,b,c)Kcna基因在不同组织中的表达比较;(a)蜕壳间期,(b)蜕壳前期,(c)蜕壳后期;(d,e,f,g,h,i)Kcna基因在相关组织不同蜕壳时期的表达比较;(d)肌肉,(e)心脏,(f)肠道,(g)肝胰腺,(h)鳃,(i)眼柄。图中不同小写字母表示组间存在显著差异(P< 0.05)。

(a,b,c) the expression profiles of Kcna gene among different tissues,(a)inter-molting,(b)pre-molting,(c)post-molting.(d,e,f,g,h,i) the expression profiles of Kcna gene among different molting stages in relative tissues,(d)muscle,(e)heart,(f)intestine,(g)hepatopancreas,(h)gill,(i)eyestalk. Different lowercase letters indicate significant differences among groups (P< 0.05).

从不同蜕壳时期来看,Es-Kcna基因在肌肉、心脏、肠道和肝胰腺中的表达量均是蜕壳间期最高;在肌肉中,蜕壳间期的表达量显著高于前期和后期(P< 0.05),见图3d;在心脏中的表达量则是前期和间期显著高于后期(P< 0.05),见图3e;在眼柄中,蜕壳后期的表达量显著高于前期和间期(P< 0.05),见图3i;在肠道和肝胰腺中的表达量均是间期>前期>后期,但都无显著差异(P> 0.05),见图3f,3g;在鳃中的表达量则是后期>前期>间期,无显著差异(P> 0.05),见图3h。

2.3 Kcna基因的RNA干扰效应

经过一个完整蜕壳周期的RNA干扰,发现对照组终末体质量(W2)、终末步足长度(F2)和蜕壳增重率(WGR)都显著高于实验组(P< 0.05);终末壳长(L2)、蜕壳周期(MI)和特定生长率(SGR)无显著变化(P> 0.05),见表2。肌肉组织切片结果显示,实验组第二步足肌纤维直径为(174.26±24.31)μm,对照组为(187.74±35.40)μm,实验组小于对照组,但差异不显著(P> 0.05),见图版。

表2  Kcna基因RNA干扰对中华绒螯蟹生长性状的影响(n=18)
Tab.2  Effects of RNA interference for Kcna gene on growth performance of E.sinensisn=18)
生长指标Indicators of growth实验组Experimental group对照组Control group
初始体质量Initail body mass/g 2.83±0.41 2.85±0.35
终末体质量Final body mass/g 3.44±0.52b 3.56±0.61a
初始壳长Initail carapace length/mm 16.28±0.69 16.63±0.72
终末壳长Final carapace length/mm 18.11±0.45 18.29±0.41
初始步足长度Initial leg length/mm 12.31±0.74 12.64±0.72
终末步足长度Final leg length/mm 13.86±0.45b 14.45±0.41a
蜕壳周期Molting interval/d 27.81±4.22 28.26±3.94
蜕壳增重率Weight gain rate after molting/% 21.31±3.14b 25.75±4.60a
特定生长率Specific growth rate/(%/d) 0.70±0.23 0.78±0.34

注:  表中不同小写字母表示组间存在显著差异(P< 0.05)。

Notes:   Different lowercase letters in the table indicate significant differences between groups (P< 0.05).

2.4 Kcna基因的SNP分子标记筛选及与地理种群、生长性状关联分析

图版   RNA干扰后第二步足肌纤维直径变化

Plate   Changes in muscle fiber diameter of the second walking leg after RNA interference

1.对照组; 2.实验组。

1.Control group; 2.Experimental group.

对256只来自于长江和辽河水系的野生样本和245只养殖样本进行Kcna基因的PCR产物测序,在Es-Kcna基因第8外显子上鉴定出一个SNP突变位点(A1 461G)。将该位点与野生样本的水系来源进行关联,结果发现长江水系中华绒螯蟹中Kcna基因的AA型的比例显著高于GG型,在2005年度时AA的比例达到了63.30%(表3);而辽河水系中华绒螯蟹中Kcna基因的GG型的比例显著高于AA型,在1999年度中辽河水系中GG型比例达86.11%,而2017年度GG型比例达到了97.83%(表3)。GG基因型在野生辽河水系中显著富集,而AA基因型在野生长江水系中富集(表3)。

表3  中华绒螯蟹长江和辽河野生群体中不同年份Kcna基因SNP的分布频率
Tab.3  SNP distribution frequency of Kcna gene in wild populations of E.sinensis from the Yangtze and Liaohe rivers in different years

基因型

Genotypes

1999年2005年2014年2017年

长江

Yangtze

river

辽河

Liaohe

river

长江

Yangtze

river

辽河

Liaohe

river

长江

Yangtze

river

辽河

Liaohe

river

长江

Yangtze

river

辽河

Liaohe

river

AA 0% 63.30% 50% 20.34% 37.21% 0%
GG 86.11% 0.70% 11.90% 67.80% 18.60% 97.83%
AG 13.89% 30.00% 38.10% 11.86% 44.19% 2.17%

注:  “⁃”代表未分析该年度的野生样本。

Notes:   “⁃” means no wild individuals used for the year.

将该SNP分子标记位点(A1 461G)与体质量、壳长、步足长度进行关联分析。在具有表型数据的190只野生群体中,由于采集的野生个体规格差异较大,故体质量、壳长、步足长度本身存在一定的差异,为了减少误差,将步足长度矫正为比例性状,即步足长度/壳长,发现AA型平均步足长度比例为0.75,显著高于AG型的0.73和GG型的0.70(P< 0.05),见表4;在245只养殖群体中,AA型平均比例为0.72,显著高于AG型的0.71和GG型的0.70(P< 0.05),见表4

表4  中华绒螯蟹Kcna基因突变位点与生长性状关联分析
Tab.4  Correlation analysis of Kcna gene mutation site with growth traits

项目

Items

基因型

Genotypes

样本量

Numbers/只

体质量

Mass/g

壳长

Carapace length/mm

步足长度

Leg length/mm

步足长度/壳长

Leg length/ carapace length

野生群体

Wild population

AA 49 116.22±55.86b 55.75±7.32b 41.64±5.96a 0.75±0.05a
GG 98 137.39±53.14a 58.93±6.70a 41.19±5.72b 0.70±0.05c
AG 43 139.04±52.29a 59.35±6.50a 43.55±6.00a 0.73±0.06b

养殖群体

Cultured population

AA 17 242.06±39.03 70.60±2.57 50.64±3.70 0.72±0.03a
GG 42 234.33±51.86 70.20±4.40 49.19±4.82 0.70±0.04c
AG 186 237.45±46.91 70.44±3.85 50.07±3.26 0.71±0.04b

注:  表中不同小写字母表示组间存在显著差异(P< 0.05)。

Notes:   Different lowercase letters in the table indicate significant differences between groups (P< 0.05).

3 讨论

中华绒螯蟹Kcna基因编码的蛋白具有1个BTB结构域和5个跨膜结构区,符合典型的电压门控钾离子通道蛋白结构特

21。BTB结构域最早由LASKI22⁃23在果蝇体内发现。转录因子bric-a-brac、tramtrack和broad complex在其编码蛋白N端有1个序列保守的区域,这个区域被命名为BTB结构域。众多研究指出,BTB蛋白与动植物的生长发育、抗逆、转录调节、细胞骨架的组织及周期调控相24-27,推测BTB蛋白在中华绒螯蟹的生长发育中参与肌肉细胞的生长、增殖以及蜕壳前后肌细胞骨架重塑等一系列生物学过程。系统进化树结果显示与三疣梭子蟹亲缘性最高且甲壳动物聚为单独的进化枝,表明Kcna基因在甲壳动物的进化过程中相对保守,可能具有相似生物学功能。

Kcna基因在动物肌肉细胞发育和骨骼肌收缩中扮演着重要的分子调控角色,这已经得到了先前研究的证

728⁃29。本研究通过荧光定量PCR实验发现,Es-Kcna基因在不同蜕壳时期的肌肉和心脏中均高表达,这提示该基因可能参与了中华绒螯蟹的肌肉发育过程,进而影响其生长发育。据研究表明,蜕壳间期是中华绒螯蟹蜕壳周期中的一个关键阶段,为生长和发育提供能量积30,因此,蜕壳间期高表达的Kcna基因可能通过调控肌肉细胞的增殖来为其生长发育积累能量。此外,KON8和SILIC9的研究表明钾离子通道蛋白基因家族其他相关基因能够调节金鱼和斑马鱼的尾鳍长度。在本研究中,我们利用RNA干扰技术成功敲降了Kcna基因的表达。结果显示,敲降Kcna基因的表达后,扣蟹体质量、蜕壳增重率和步足长度显著降低,步足肌纤维直径也变短。因此,推测Kcna基因正向调控中华绒螯蟹肌肉细胞的增殖和骨骼肌的收缩,并影响了中华绒螯蟹的步足长度。然而,关于Kcna基因如何调控中华绒螯蟹肌肉发育和步足长度的分子机制仍有待后续进一步深入研究。

目前,随着现代分子生物学和遗传学的不断发展,中华绒螯蟹分子育种技术也日益展开。陈义培

31报道了中华绒螯蟹MSTN基因的C714位点TT基因型对生长最为有利;姜鹏飞19在中华绒螯蟹Scarb1基因第1外显子筛选到1个SNP位点C432T,表现为TT基因型在蜕壳后体质量、壳长显著增加。本研究成功从中华绒螯蟹Kcna基因的第8外显子中筛选到1个SNP位点,即A1 461G。此SNP分子标记在长江和辽河水系的野生中华绒螯蟹种群中表现出明显的基因型分布差异。具体来说,长江水系中AA型的频率较高,而辽河水系中GG型的频率较高。目前,中华绒螯蟹不同水系的区分主要依赖于外部形态指标、蜕壳次数、繁殖行为、生化指标以及微卫星多态性等方32⁃34。相比之下,利用SNP分子标记进行不同水系区分的研究较少。因此,该SNP位点有可能成为鉴别中华绒螯蟹不同水系种质的重要分子标记。此外,还发现在野生和养殖的中华绒螯蟹群体中,Kcna基因的SNP位点(A1 461G)为AA型的个体其步足长度显著长于GG型的个体。结合之前的研究,Kcna基因具有正向调控肌肉发育的功能。因此,这个SNP位点也有可能成为中华绒螯蟹良种选育的分子辅助育种标记。

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