采用碳二亚胺法，制备了环丙沙星-小牛血清蛋白偶联物，评价了pH、环丙沙星和碳二亚胺浓度对偶联结合比率的影响。同时采用红外光谱、紫外光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱方法对偶联产物的基团、分子量等特征进行分析鉴定。正交试验结果表明，pH对环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联结合比率具有显著性差异，碳二亚胺和环丙沙星浓度差异性不显著。在pH5．0，碳二亚胺和环丙沙星浓度分别为60mg/mL和5mg／mL的条件下，环丙沙星-小牛血清蛋白偶联结合比率为30：1。该方法条件下的偶联反应成功。结论：该方法可用于环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联，且简便易行。